Pembuatan Media Uji Bakteri ( I )

Pembuatan Media Uji Bakteri ( I )                                                1.     PCA (plate count agar) Ambil Media merk MERCK sebanyak 22,5 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam  cawan petri sesuai dengan keperluan pembuatan media 2.    LSB ( Lauryl Sulfate Broth) Ambil Media merk MERCK sebanyak 35,6 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi ( + tabung durham) sesuai dengan keperluan pembuatan media. 3.    EC Broth Ambil Media merk MERCK sebanyak 37 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi( + tabung durham)  sesuai dengan keperluan pembuatan media.

4.  L-EMB Agar  (Levine’s Eosin Methylen Blue) Ambil Media merk MERCK sebanyak 36 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam cawan petri sesuai dengan keperluan pembuatan media. 4.    Triptone Broth Ambil Media merk MERCK sebanyak 15 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media. 5.           MIO Medium Ambil Media merk DIFCO sebanyak 31 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media.

6.    MRVP Medium Ambil 17 gram bubuk MRVP merk MERCK dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit, tuang ke dalam tabung reaksi sebanyak 5 ml. a.     Reagen pH Indikator Methyl Red Ambil 0,1 g methyl red merk MERCK dilarutkan dalam 300 ml ethanol 95 %, tambahkan 200 ml akuades b.      Reagen VP Barrit i.          Reagent A : 1-Naphtol merk MERCK sebanyak 5 gr dilarutkan dalam ethanol 95% sebanyak 100 ml, dihomogenkan dengan magnetic stirer, disimpan dalam botol gelap bertutup. ii.        Reagent B : KOH merk MERCK sebanyak 40 gr dilarutkan dalam akuades sebanyak 100 ml, dihomogenkan dengan magnetic stirer, disimpan dalam botol gelap bertutup. Simpan dalam kulkas. 7. Medium Simmons Citrate Ambil Media Simmons Citrate Agar merk MERCK sebanyak 22,5 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam tabung reaksi ± 4ml. Didinginkan pada posisi miring.

                     

8.    BSA (Bismuth sulfite Agar) Ambil media merk OXOID sebanyak 54 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, dipanaskan dengan hotplate pada suhu 50OC.  Selanjutnya dituang ke cawan petri & digunakan sesuai dengan keperluan pengujian. 9.    Urea Agar Ambil media merk MERCK sebanyak 21 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, homogenkan, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Tambahkan 20 gram Urea supplement 46%, tuang ke erlenmeyer.  Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media. 10. HE (Hektoen Enteric) Agar Ambil media merk MERCK sebanyak 75 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, dipanaskan dengan hotplate pada suhu 50OC.  Selanjutnya dituang ke cawan petri & digunakan sesuai dengan keperluan pengujian.

11.     XLD (Xylose Lysine Desoxycholate) Agar   Ambil media merk OXOID sebanyak 53 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, dipanaskan dengan hotplate pada suhu 50OC.  Selanjutnya dituang ke cawan petri & digunakan sesuai dengan keperluan pengujian. 12.     LB (Lactose Broth) Beef extract                                                     3 g Peptone                                                           5 g Lactose                                                            5 g Aquadest                                                      1 liter Dilarutkan semua bahan dan di sterilisasi pada suhu 121°C 15 menit. pH akhir  6,9 ± 0.2. Selanjutnya dituang ke tabung reaksi & digunakan sesuai dengan keperluan pengujian. 13.     LDB (Lysine Decarboxylase Broth) Ambil media merk DIFCO sebanyak 14 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit.   Selanjutnya dituang ke tabung reaksi, ± 5 ml, digunakan sesuai dengan keperluan pengujian.

                                                                               

14. LIA (Lysine Iron Agar) Ambil media merk MERCK sebanyak 32 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit.   Selanjutnya dituang ke tabung reaksi, ± 5 ml, didinginkan pada posisi miring dengan bagian tegak sepanjang 1,5-2 cm. Digunakan sesuai dengan keperluan pengujian. 15.     Malonate Broth   Ambil media merk DIFCO sebanyak 8 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, untuk dihomogenkan, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC  selama 15 menit.   Selanjutnya dituang ke tabung reaksi, Digunakan sesuai dengan keperluan pengujian 16.     RV (Rappaport-Vassiliadis Medium) Ambil media merk MERCK sebanyak 41.8 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media

17.  SCB (Selenite Cystine Broth) Ambil Media merk MERCK sebanyak 23 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan, dipanaskan dengan hotplate pada suhu 60OC. Selanjutnya dituang ke dalam  tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media 18.      Media Karbohidrat (dulcitol, laktosa, and sukrosa) a.                    Phenol Red Broth Base Larutkan 10 gram pepton, 1 gram beef extract, 5 gram NaCl, 0,018 gram phenol red dalam 1000 ml aquades dalam erlenmeyer yang diberi magnetik stirer. Homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih. Selanjutnya disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit, dinginkan hingga suhu sekitar 450 – 500C b.                   Metode penyiapan gula-gula (karbohidrat) ·                     Gula-gula yang digunakan : dulcitol, laktosa, and sukrosa. ·                     Tambahkan tiap gula-gula pada broth base sesuai dengan konsentrasi yang diinginkan, yaitu : 10 gram gula-gula per liter broth base sehingga konsentrasi akhir 10 %. ·                     Sterilkan pada suhu 121OC selama 15 menit, setelah dingin kemudian tuang ke dalam tabung reaksi. Untuk sukrosa sterilkan pada suhu 121OC selama 4 menit

                                                                      

19.     TSIA (Triple Sugar Iron Agar) Ambil Media merk MERCK sebanyak 65 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam pada tabung reaksi ± 5 ml didinginkan pada posisi miring dengan bagian tegak sepanjang 1,5-2 cm, digunakan sesuai dengan keperluan pembuatan media. 20.     Potassium cyanide (KCN) Broth Potassium   cyanide                                                                          0,5 g Protease Peptone No. 3 atau PolyPeptone                                             3 g NaCl                                                                                                   5 g KH2PO4                                                                                                                                                                               0,225 g Na2HPO4                                                                                                                                                                               5,64 g Aquadest                                                                                         1 liter Dilarutkan semua bahan (kecuali potassium cyanide) dan disterilisasi pada suhu 121°Cselama  15 menit. Didinginkan dan disimpan pada suhu 5°C-8°C. pH akhir 7.6 ± 0.2. Disiapkan larutan KCN stock dengan cara melarutkan 0.5 g KCN kedalam 100 ml Aquadest steril, didinginkan hingga suhu  5°C-8°C. Dengan menggunakan pipet bulb, tambahkan  15 ml larutan KCN stock kedalam 1 liter media basal steril dingin. Jangan dipipet dengan mulut.  Dikocok dan  dipindahkan sebanyak 1-1,5 ml ke dalam tabung steril dan ditutup dengan paraffin. Media ini dapat disimpan pada suhu 5°C-8°C, selama 2 minggu sebelum digunakan.

22. TTB (Tetrathionate Broth) Ambil Media merk MERCK sebanyak 46 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan, dipanaskan dengan hotplate sampai mendidih. Jangan di Autoclave . (Bahan tidak semuanya terlarut). Didinginkan sampai kurang dari 45°C. simpan pada suhu 5°C - 8°C . Larutan Iodine-Potassium iodide (I2-KI) Potassium iodide                                                         5 Iodine, resublimed                                                      6 g Aquadest steril                                                       20 ml Dilarutkan Potassium iodide dalam  5 ml Aquadest steril.  Ditambahkan iodine (I2) dan aduk agar melarut.  Dilarutkan sampai 20 ml. Larutan Brilliant green Brilliant green dye steril                                             0,1 g Aquadest steril                                                       100 ml Pada  saat  digunakan,  ditambahkan  20  ml  larutan  I2-KI  dan  10  ml  larutan  Brilliant  green kedalam  1  liter  basal.   Diaduk  agar  semua  bahan  tercampur  dan  tuang  sebanyak  10  ml kedalam tabung reaksi steril.  Tidak memanaskan media setelah penambahan larutan I2-KI dan larutan Brilliant green. 23.Tryptone (Trytophane) Broth 1% Ambil Media merk MERCK sebanyak 15 gram dilarutkan sampai 1000 ml akuades dalam erlenmeyer yang diberi stirer magnetik, homogenkan lalu dipanaskan hingga mendidih selama 1 menit, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Selanjutnya dituang ke dalam tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media.

24.TSTB (Trypticase Soy - Tryptose Broth) Trypticase Soy Broth                                                15 g Trytose Broth                                                        13.5 g Yeast extract                                                             3 g Aquadest                                                               1 liter Dilarutkan semua bahan dalam 1 liter Aquadest dengan sedikit pemanasan. Disterilisasi pada suhu  121°C selama  15 menit.  Selanjutnya dituang ke dalam tabung reaksi sesuai dengan keperluan pembuatan media. 25. BFP (Butterfield’s buffered phosphate) Larutan stok: Timbang media merk MERCK KH2PO4 sebanyak 34 gram dalam 500 ml akuades, atur pH 7.2 dengan 1 N NaOH, tambahkan akuades sampai volume 1000 ml, homogenkan, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit. Larutan kerja: pipet 10 ml larutan stok dan tepatkan hingga 1000 ml dengan penambahan akuades, sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121OC selama 15 menit.  Selanjutnya digunakan sesuai dengan keperluan pengujian.       26. Larutan Formalinized Physiological Saline Larutan formaldehyde                                  6 ml NaCl                                                        8,5 g Aquadest                                                 1 liter Dilarutkan  8,5 g NaCl dalam  1 liter Aquadest dalam erlenmeyer. Sterilisasikan pada suhu  121°C selama  15 menit. Dinginkan pada temperatur ruang.  Ditambahkan 6 ml larutan formaldehyde. Jangan di Autoclave setelah penambahan formaldehyde.

27. Larutan Physiological Saline 0,85% NaCl                                                           8,5 g Aquadest                                                   1 liter Dilarutkan 8,5 g NaCl dalam Aquadest   di dalam erlenmeyer. Disterilisasikan pada suhu 121°C selama 15 menit. 28. Larutan1 N Sodium Hydroxide Solution NaOH                                                          40 g Aquadest                                                 100 ml Dilarutkan NaOH dalam Aquadest di dalam erlenmeyer. 29. Larutan 1 N Hydrochloric Acid HCl                                                                    89 g Aquadest                                                            1liter Dilarutkan HCl dalam Aquadest di dalam erlenmeyer.        30. Pewarnaan Gram ( Gram Stain ) a.                    Gram A : Kristal violet                              2 gram                             Ethanol 95%                              20 ml                             Ammonium oxalat                      0,8 gram                             Aquades                                   80 ml b.                   Gram B : Lugol:               Iodine               5 gram                                                     Kalium iodida     10 gram                                                             Aquades           100 ml  c.    Gram C :          Ethanol 95 %                          97 ml                              HCl 37 %                                   3 ml d.    Gram D :         Safranin                                    0,25 gram                             Ethanol 95 %                             10 ml                        Aquades                                   90 ml

31.          Oksidase       Ambil reagen N, N, N, N Tetrametyl – p – phenelediamine dihydrochlorida merk MERCK sebanyak 1 gram kemudian dilarutkan dalam aquades sampai volume 100 ml. 32.          Katalase Ambil H2O2 merk MERCK sebanyak 3 ml dengan menggunakan gelas labu ukur dan tambah aquades sampai volume 100 ml kemudian simpan di botol gelap yang tertutup.            33.          Media 4 % NaCl Ambil media TSA merk MERCK sebanyak 4 gr, tambahkan kristal NaCl merk MERCK sebanyak 3,5 gram, dilarutkan hingga dalam 100 ml akuades.